Tests de détection de l'antigène du paludisme - Malaria antigen detection tests

Tests de détection de l'antigène du paludisme
Jauge médicale diagnostique.png
Un schéma de principe d'une jauge
But diagnostic de paludisme...

Les tests de détection de l'antigène du paludisme sont un groupe de tests de diagnostic rapide disponibles dans le commerce du type de test d'antigène rapide qui permettent un diagnostic rapide du paludisme par des personnes qui ne sont pas autrement qualifiées dans les techniques de laboratoire traditionnelles pour diagnostiquer le paludisme ou dans des situations où un tel équipement n'est pas disponible. Il existe actuellement plus de 20 tests de ce type disponibles dans le commerce (WHO product testing 2008). Le premier antigène du paludisme convenant comme cible pour un tel test était une enzyme glycolytique soluble, la glutamate déshydrogénase . Aucun des tests rapides n'est actuellement aussi sensible qu'un frottis sanguin épais , ni aussi bon marché. Un inconvénient majeur de l'utilisation de toutes les méthodes de jaugeage actuelles est que le résultat est essentiellement qualitatif. Dans de nombreuses zones d'endémie d' Afrique tropicale , cependant, l'évaluation quantitative de la parasitémie est importante, car un grand pourcentage de la population sera testé positif dans n'importe quel test qualitatif.

Tests de diagnostic rapide du paludisme à base d'antigènes

Le paludisme est une maladie curable si les patients ont accès à un diagnostic précoce et à un traitement rapide . Les tests de diagnostic rapide (TDR) à base d'antigènes jouent un rôle important à la périphérie des capacités des services de santé, car de nombreuses cliniques rurales n'ont pas la capacité de diagnostiquer le paludisme sur place en raison du manque de microscopes et de techniciens formés pour évaluer les frottis sanguins. De plus, dans les régions où la maladie n'est pas endémique , les techniciens de laboratoire ont une expérience très limitée dans la détection et l'identification des parasites du paludisme. Un nombre toujours croissant de voyageurs en provenance des zones tempérées visitent chaque année les pays tropicaux et nombre d'entre eux reviennent avec une infection paludéenne. Les tests RDT sont toujours considérés comme des compléments à la microscopie conventionnelle mais avec quelques améliorations, ils pourraient bien remplacer le microscope . Les tests sont simples et la procédure peut être effectuée sur place dans des conditions de terrain. Ces tests utilisent du sang prélevé au doigt ou veineux , le test terminé prend un total de 15 à 20 minutes et un laboratoire n'est pas nécessaire. Le seuil de détection par ces tests de diagnostic rapide est de l'ordre de 100 parasites/µl de sang contre 5 par microscopie à couche épaisse.

pGluDH

Plasmodium Glutamate déshydrogénase (pGluDH) précipité par les anticorps de l'hôte

Un diagnostic précis devient de plus en plus important, compte tenu de la résistance croissante de Plasmodium falciparum et du prix élevé des alternatives à la chloroquine . L'enzyme pGluDH n'est pas présente dans le globule rouge de l'hôte et a été recommandée comme enzyme marqueur pour les espèces Plasmodium par Picard-Maureau et al. en 1975. Le test enzymatique marqueur du paludisme convient aux travaux de routine et est désormais un test standard dans la plupart des départements s'occupant du paludisme. La présence de pGluDH est connue pour représenter la viabilité du parasite et un test de diagnostic rapide utilisant pGluDH comme antigène aurait la capacité de différencier les organismes vivants des organismes morts. Un TDR complet avec pGluDH comme antigène a été développé en Chine et fait actuellement l'objet d'essais cliniques . Les GluDH sont des enzymes omniprésentes qui occupent un important point de branchement entre le métabolisme du carbone et de l'azote. Les deux enzymes nicotinamide adénine dinucléotide (NAD) [EC 1.4.1.2] et nicotinamide adénine dinucléotide phosphate (NADP) dépendantes des enzymes GluDH [EC 1.4.1.4] sont présentes dans Plasmodia ; le GluDH dépendant du NAD est relativement instable et n'est pas utile à des fins de diagnostic. La glutamate déshydrogénase fournit une source de carbone oxydable utilisée pour la production d'énergie ainsi qu'un porteur d'électrons réduit, le NADH. Le glutamate est le principal donneur d' amino d' autres acides aminés dans les réactions de transamination ultérieures. Les multiples rôles du glutamate dans l'équilibre azoté en font une passerelle entre l'ammoniac libre et les groupes aminés de la plupart des acides aminés. Sa structure cristalline est publiée. L'activité GluDH dans P.vivax , P.ovale et P. malariae n'a jamais été testée, mais étant donné l'importance de GluDH en tant qu'enzyme de point de ramification, chaque cellule doit avoir une concentration élevée de GluDH. Il est bien connu que les enzymes à haut poids moléculaire (comme la GluDH) possèdent de nombreuses isozymes , ce qui permet des différenciations de souches (à condition d'avoir le bon anticorps monoclonal ). L'hôte produit des anticorps contre l'enzyme parasite indiquant une faible identité de séquence.

Protéine riche en histidine II

La protéine II riche en histidine (HRP II) est une protéine hydrosoluble riche en histidine et en alanine , qui est localisée dans plusieurs compartiments cellulaires, y compris le cytoplasme du parasite. L'antigène n'est exprimé que par les trophozoïtes de P. falciparum . La HRP II de P. falciparum a été impliquée dans la biocristallisation de l' hémozoïne , une forme cristalline inerte de ferriprotoporphyrine IX (Fe(3+)-PPIX) produite par le parasite. Une quantité substantielle de HRP II est sécrétée par le parasite dans la circulation sanguine de l'hôte et l'antigène peut être détecté dans les érythrocytes , le sérum , le plasma , le liquide céphalo-rachidien et même l' urine en tant que protéine hydrosoluble sécrétée. Ces antigènes persistent dans le sang circulant après que la parasitémie a disparu ou a été fortement réduite. Il faut généralement environ deux semaines après un traitement réussi pour que les tests basés sur HRP2 deviennent négatifs, mais cela peut prendre jusqu'à un mois, ce qui compromet leur valeur dans la détection d'une infection active. Des résultats faussement positifs de la bandelette réactive ont été rapportés chez des patients atteints de polyarthrite rhumatoïde à facteur rhumatoïde positif . Comme HRP-2 n'est exprimé que par P. falciparum , ces tests donneront des résultats négatifs avec des échantillons contenant uniquement P. vivax , P. ovale ou P. malariae ; de nombreux cas de paludisme autre que falciparum peuvent donc être diagnostiqués à tort comme étant négatifs pour le paludisme (certaines souches de P.falciparum n'ont pas non plus de HRP II). La variabilité des résultats des TDR basés sur pHRP2 est liée à la variabilité de l'antigène cible.

pLDH

Comparaison des anticorps antipaludiques de la lactate déshydrogénase de Plasmodium (PLDH)

La lactate déshydrogénase de P. falciparum (PfLDH) est une oxydoréductase de 33 kDa [EC 1.1.1.27]. C'est la dernière enzyme de la voie glycolytique, essentielle à la génération d' ATP et l'une des enzymes les plus abondantes exprimées par P. falciparum . Plasmodium LDH (pLDH) de P. vivax , P. malariae et P. ovale ) présentent une identité de 90 à 92 % avec PfLDH de P. falciparum . Il a été observé que les taux de pLDH diminuaient dans le sang plus tôt après le traitement que ceux de HRP2. A cet égard, pLDH est similaire à pGluDH. Néanmoins, les propriétés cinétiques et les sensibilités aux inhibiteurs ciblés sur le site de liaison du cofacteur diffèrent significativement et sont identifiables en mesurant les constantes de dissociation des inhibiteurs qui diffèrent jusqu'à 21 fois.

pAldo

La fructose-bisphosphate aldolase [EC 4.1.2.13] catalyse une réaction clé dans la glycolyse et la production d'énergie et est produite par les quatre espèces. L' aldolase de P.falciparum est une protéine de 41 kDa et présente une similarité de séquence de 61 à 68 % avec les aldolases eucaryotes connues . Sa structure cristalline a été publiée. La présence d'anticorps contre p41 dans les sérums d'adultes humains partiellement immunisés contre le paludisme suggère que p41 est impliqué dans la réponse immunitaire protectrice contre le parasite.

Voir également

Les références

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Liens externes