Lame de microscope - Microscope slide
Une lame de microscope est un mince morceau de verre plat , généralement de 75 x 26 mm (3 x 1 pouces) et d'environ 1 mm d'épaisseur, utilisé pour contenir des objets à examiner au microscope . En règle générale, l'objet est monté (fixé) sur la lame, puis les deux sont insérés ensemble dans le microscope pour la visualisation. Cette disposition permet à plusieurs objets montés sur lame d'être rapidement insérés et retirés du microscope, étiquetés, transportés et stockés dans des étuis ou des dossiers de lames appropriés, etc.
Les lames de microscope sont souvent utilisées avec une lamelle ou une lamelle de protection, une feuille de verre plus petite et plus mince qui est placée sur l'échantillon. Les lames sont maintenues en place sur la platine du microscope par des pinces pour lames, des pinces pour lames ou une table croisée qui est utilisée pour obtenir un mouvement précis et à distance de la lame sur la platine du microscope (comme dans un système automatisé/commandé par ordinateur, ou lorsque vous touchez la lame avec les doigts est inappropriée soit par risque de contamination, soit par manque de précision).
Histoire
L'origine du concept était des morceaux d' ivoire ou d' os , contenant des spécimens maintenus entre des disques de mica transparent , qui glissaient dans l'espace entre la scène et l'objectif. Ces « curseurs » étaient populaires dans l' Angleterre victorienne jusqu'à ce que la Royal Microscopical Society présente la lame de microscope en verre standardisée.
Dimensions et types
Une lame de microscope standard mesure environ 75 mm sur 25 mm (3″ par 1″) et a une épaisseur d'environ 1 mm. Une gamme d'autres tailles est disponible pour diverses utilisations spéciales, telles que 75 x 50 mm pour une utilisation géologique , 46 x 27 mm pour les études pétrographiques et 48 x 28 mm pour les lames minces . Les diapositives sont généralement faites de verre ordinaire et leurs bords sont souvent finement meulés ou polis.
Les lames de microscope sont généralement faites de verre de qualité optique , comme le verre sodocalcique ou le verre borosilicaté , mais des plastiques spéciaux sont également utilisés. Les lames de quartz fondu sont souvent utilisées lorsque la transparence ultraviolette est importante, par exemple en microscopie à fluorescence .
Bien que les diapositives simples soient les plus courantes, il existe plusieurs types spécialisés. Une lame à concavité ou une lame à cavité comporte une ou plusieurs dépressions peu profondes (« puits »), conçues pour contenir des objets légèrement plus épais et certains échantillons tels que des liquides et des cultures de tissus . Les glissières peuvent avoir des coins arrondis pour une sécurité ou une robustesse accrue, ou un coin coupé à utiliser avec une pince à glissière ou une table transversale, où la glissière est fixée par un bras incurvé à ressort en contact avec un coin, forçant le coin opposé du glisser contre un bras à angle droit qui ne bouge pas. Si ce système était utilisé avec une lame qui n'incorporait pas ces coins coupés, les coins s'écailleraient et la lame pourrait se briser.
Une lame de graticule est marquée d'une grille de lignes (par exemple, une grille de 1 mm) qui permet d'estimer facilement la taille des objets vus sous grossissement et fournit des zones de référence pour compter les objets minuscules. Parfois, un carré de la grille sera lui-même subdivisé en une grille plus fine. Les lames destinées à des applications spécialisées, telles que les hémocytomètres pour le comptage cellulaire, peuvent avoir divers réservoirs, canaux et barrières gravés ou rectifiés sur leur surface supérieure. Divers marquages ou masques permanents peuvent être imprimés , sablés ou déposés en surface par le fabricant, généralement avec des matériaux inertes tels que le PTFE .
Une lame Neubauer pour le comptage cellulaire.
|
Image au microscope d'un graticule de lame Neubauer utilisé pour compter les cellules .
|
Certaines diapositives ont une zone dépolie ou émaillée à une extrémité, pour l'étiquetage avec un crayon ou un stylo. Les lames peuvent avoir des revêtements spéciaux appliqués par le fabricant, par exemple pour une inertie chimique ou une adhérence cellulaire améliorée . Le revêtement peut avoir une charge électrique permanente pour contenir des échantillons minces ou pulvérulents. Les revêtements courants incluent la poly-L-lysine , les silanes , les résines époxy ou même l' or .
Montage
Le montage des échantillons sur des lames de microscope est souvent essentiel pour une visualisation réussie. Le problème a reçu beaucoup d'attention au cours des deux derniers siècles et est un domaine bien développé avec de nombreuses techniques spécialisées et parfois assez sophistiquées. Les spécimens sont souvent maintenus en place à l'aide de lamelles de verre plus petites .
La fonction principale de la lamelle est de maintenir les échantillons solides pressés à plat et les échantillons liquides façonnés en une couche plate d'épaisseur uniforme. Cela est nécessaire car les microscopes à haute résolution ont une région très étroite dans laquelle ils se concentrent.
Le verre de couverture a souvent plusieurs autres fonctions. Il maintient l'échantillon en place (soit par le poids de la lamelle, soit, dans le cas d'un montage humide, par la tension superficielle ) et protège l'échantillon de la poussière et des contacts accidentels. Il protège l' objectif du microscope du contact avec l'échantillon et vice versa ; en microscopie à immersion dans l' huile ou dans l' eau, la lamelle empêche le contact entre le liquide d'immersion et l'échantillon. La lamelle peut être collée sur la lame de manière à sceller l'échantillon, retardant la déshydratation et l' oxydation de l'échantillon et empêchant également la contamination. Un certain nombre de scellants sont utilisés, y compris des scellants commerciaux, des préparations de laboratoire ou même du vernis à ongles transparent ordinaire , selon l'échantillon. Un scellant sans solvant qui peut être utilisé pour les échantillons de cellules vivantes est le « valap », un mélange de vaseline , de lanoline et de paraffine à parts égales. Les cultures microbiennes et cellulaires peuvent être cultivées directement sur la lamelle avant qu'elle ne soit placée sur la lame, et les échantillons peuvent être montés en permanence sur la lamelle plutôt que sur la lame.
Les lamelles de couverture sont disponibles dans une gamme de tailles et d'épaisseurs. L'utilisation d'une mauvaise épaisseur peut entraîner une aberration sphérique et une réduction de la résolution et de l'intensité de l'image. Les objectifs spécialisés peuvent être utilisés pour imager des spécimens sans lamelles ou peuvent avoir des colliers de correction qui permettent à un utilisateur de s'adapter à une autre épaisseur de lamelle.
Montage à sec
Dans un montage à sec , le type de montage le plus simple, l'objet est simplement posé sur la glissière. Une lamelle peut être placée sur le dessus pour protéger l'échantillon et l'objectif du microscope et pour maintenir l'échantillon immobile et pressé à plat. Ce support peut être utilisé avec succès pour visualiser des spécimens comme le pollen, les plumes, les poils, etc. Il est également utilisé pour examiner les particules capturées dans des filtres à membrane transparents (par exemple, dans l'analyse de la poussière en suspension dans l' air ).
Montage humide ou montage temporaire
Dans un montage humide , l'échantillon est placé dans une goutte d' eau ou d'un autre liquide maintenu entre la lame et la lamelle par tension superficielle . Cette méthode est couramment utilisée, par exemple, pour visualiser des organismes microscopiques qui se développent dans l'eau d'un étang ou d'autres milieux liquides, en particulier lors de l'étude de leurs mouvements et de leur comportement. Des précautions doivent être prises pour exclure les bulles d'air qui gêneraient l'observation et gêneraient les mouvements des organismes. Un exemple de monture humide temporaire est une monture lactofuchsine , qui fournit à la fois un montage d'échantillon, ainsi qu'une coloration à la fuchsine .
Monture préparée ou monture permanente
Pour la recherche pathologique et biologique , le spécimen subit généralement une préparation histologique complexe qui consiste à le fixer pour éviter la pourriture, éliminer toute l'eau qu'il contient, remplacer l'eau par de la paraffine , le couper en sections très minces à l'aide d'un microtome , placer les sections sur un lame de microscope, coloration du tissu à l'aide de diverses colorations pour révéler des composants tissulaires spécifiques, nettoyage du tissu pour le rendre transparent et le recouvrir d'une lamelle et d'un support de montage.
Mont éparpillé
Le montage éparpillé décrit la production de lames de microscope palynologique en suspendant un échantillon concentré dans de l'eau distillée , en plaçant les échantillons sur une lame et en laissant l'eau s'évaporer .
Supports de montage
Le milieu de montage est la solution dans laquelle l'échantillon est noyé, généralement sous une lamelle. Des liquides simples comme l'eau ou le glycérol peuvent être considérés comme des supports de montage, bien que le terme se réfère généralement à des composés qui durcissent en un support permanent. Un milieu de montage les plus populaires sont Permount , et le moyen de montage de Hoyer et une alternative glycérine gelée propriétés d'un bon milieu de montage comprennent ayant un indice de réfraction proche de celui du verre (1,518), la non-réactivité avec l'échantillon, de la stabilité dans le temps sans cristallisation, assombrissement, ou changer l'indice de réfraction, la solubilité dans le milieu dans lequel l'échantillon a été préparé (soit aqueux soit non polaire , tel que le xylène ou le toluène ), et ne pas provoquer la décoloration ou le lessivage de la tache de l'échantillon.
Exemples de supports de montage
Aqueux
Populairement utilisé dans la cytochimie immunofluorescente où la fluorescence ne peut pas être archivée. Le stockage temporaire doit se faire dans une chambre sombre et humide. Des exemples courants sont :
- Glycérol-PBS (9:1) avec antiquench, par exemple l'un des suivants
- p-phénylènediamine
- gallate de propyle
- 1,4-Diazabicyclo (2,2,2)-octane (DABCO) (très populaire)
- Acide ascorbique
- Mowiol ou Gelvatol
- Gélatine
- Monter
- Vectashield
- Prolonger l'or
- CyGEL / CyGEL Sustain (pour immobiliser les cellules et organismes vivants non fixés)
Non aqueux
Utilisé lorsqu'un montage permanent est requis
- Permount (toluène et un polymère d'a-pinène, b-pinène, dipentène, b-phellandrène)
- baume du Canada
- DPX ( D istrene 80 - un commercial polystyrène , un p lasticizer par exemple le phtalate de dibutyle et le xylène )
- DPX nouveau (avec du xylène mais sans phtalate de dibutyle cancérigène )
- Entellan (avec toluène)
- Entellan nouveau
- Milieu de Hoyer aux halogénures de Hempstead (une formulation exclusive du milieu de Hoyer traditionnel contenant 60 % de chloral , mais exempt de substances cancérigènes connues)
- Neo-Mount (compatible avec le néo-clair aliphatique mais pas compatible avec les solvants aromatiques comme le xylène)
Contrastant avec d'autres types/significations de « montage »
Contrairement au montage nécessaire pour les lamelles couvre-objet en verre, un montage quelque peu similaire peut être effectué pour la conservation de spécimens plus volumineux dans des récipients en verre dans les musées. Cependant, un type de montage entièrement différent est effectué pour la préparation des échantillons , qui peut concerner des matériaux biologiques ou non biologiques et est en outre subdivisé en processus de montage de type « chaud » (compressif) et « froid » (moulable). Bien que nommé « montage », il s'apparente davantage à l'enrobage en histologie et ne doit pas être confondu avec le montage décrit ci-dessus. Le terme montage dans d'autres domaines a de nombreuses autres significations.