ADN polymérase Pfu - Pfu DNA polymerase

L' ADN polymérase Pfu est une enzyme trouvée dans l' archéon hyperthermophile Pyrococcus furiosus , où elle fonctionne pour copier l' ADN de l'organismependant la division cellulaire. En laboratoire, Pfu est utilisé pour amplifier l' ADN dans la réaction en chaîne par polymérase (PCR), où l'enzyme remplit la fonction centrale de copier un nouveau brin d'ADN au cours de chaque étape d'extension.

Il est une famille B l' ADN polymérase . Il possède un domaine d'exonucléase 3'-5 'semblable à la RNase H , typique de la polymérase de la famille B telle que l' ADN polymérase II .

Capacité de relecture de la Pfu polymérase

L' ADN polymérase Pfu possède des propriétés de thermostabilité et de relecture supérieures à celles de l' ADN polymérase Taq . Contrairement à la Taq ADN polymerase, la Pfu ADN polymerase possède 3' à 5' exonucléase activité de relecture, ce qui signifie que l'ADN est assemblé à partir de l' extrémité 5' à l' extrémité 3' , l'activité exonucléase élimine immédiatement les nucléotides misincorporated à l'extrémité 3' de la croissance Brin d'ADN. Par conséquent, les fragments de PCR générés par l'ADN polymérase de Pfu auront moins d'erreurs que les inserts de PCR générés par Taq .

Pfu disponible dans le commerce entraîne généralement un taux d'erreur de 1 sur 1,3 million de paires de bases et peut produire 2,6% de produits mutés lors de l'amplification de fragments de 1 kb par PCR. Cependant, Pfu est plus lent et nécessite généralement 1 à 2 minutes par cycle pour amplifier 1 kb d'ADN à 72 ° C. L'utilisation d' ADN polymérase de Pfu dans les réactions de PCR conduit également à des produits de PCR à extrémités franches.

L' ADN polymérase Pfu est donc supérieure à l' ADN polymérase Taq pour les techniques qui nécessitent une synthèse d'ADN haute fidélité, mais peut également être utilisée en conjonction avec la Taq polymérase pour obtenir la fidélité de Pfu avec la vitesse de l'activité Taq polymérase.

Histoire

Des scientifiques dirigés par Eric Mathur de la société de biotechnologie Stratagene, basée à La Jolla, en Californie , ont découvert l'ADN polymérase Pfu qui présente une fidélité de réplication significativement plus élevée que l'ADN polymérase Taq en 1991. Ils ont reçu des brevets pour Pfu déficiente en exonucléase et le Pfu complet en 1996 .

D'autres polymérases de souches de Pyrococcus telles que "Deep Vent" ( Q51334 ) de souche GB-D et Pwo ADN polymérase ont également été utilisées.

Les références

Liens externes

• Brevets américains Pfu de Stratagene
• Brevet 5,489,523
• Brevet 5,545,552